基于网络药理学探讨麻黄甘草汤治疗肺水肿的作用机制

【目的】预测麻黄甘草汤治疗肺水肿的潜在作用靶点及作用机制,并通过动物体内试验加以验证,为深入研究麻黄甘草汤的药理作用提供参考依据。【方法】通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库获取麻黄、甘草的活性成分及其作用靶点,利用GeneCards数据库收集肺水肿疾病的作用靶点,将麻黄甘草汤的成分作用靶点和肺水肿疾病靶点取交集,基于STRING数据库构建蛋白相互作用网络(PPI),使用Cytoscape 3.6软件构建成分-靶点网络图。利用DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析。对获得的关键成分和核心靶点通过AutoDock Vina进行分子对接,用以佐证网络药理学预测结果。选用2%氯化铵构建小鼠肺水肿模型,分为空白对照组、氯化铵模型组及麻黄甘草汤治疗组;空白对照组每日上午腹腔注射200μL生理盐水,氯化铵模型组和麻黄甘草汤治疗组腹腔注射200μL 2%的氯化铵溶液;氯化铵模型组和空白对照组每晚灌胃200μL生理盐水,麻黄甘草汤治疗组灌胃200μL 1 g/mL麻黄甘草汤,连续处理5 d后采用实时荧光定量PCR检测白细胞介素-6(IL6)、诱导型一氧化氮合酶(NOS2)、丝裂原...     

基于网络药理学和分子对接探究药膳“枸杞-桑椹-覆盆子汤”治疗糖尿病肾病的分子机制

传统食物与中药结合而成的特殊膳饮“枸杞-桑椹-覆盆子汤”是中华民族食疗养生文化瑰宝，其成分桑椹、枸杞和覆盆子具有降血脂、降血糖和治疗肾病等多种生理活性功能，对糖尿病肾病具有潜在的防治作用。采用网络药理学、分子对接和抗氧化测试等技术对其治疗糖尿病肾病的分子机制进行研究。运用TCMSP数据库进行“枸杞-桑椹-覆盆子汤”的活性成分及作用靶点收集，在GeneCards、OMIM、TTD和DisGeNET数据库获取糖尿病肾病相关靶点。取活性成分和疾病交集靶点，运用STRING数据库和Cytoscape 3.8.0构建“活性成分-疾病靶点”相互作用网络。基于相互作用网络，利用DAVID数据库对交集靶点进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析，并借助Cyto?scape 3.8.0中的MCODE和CytoHubba进行关键靶点筛选。利用AutoDock Vina对关键靶点与活性成分进行分子对接，评估关键靶点与活性成分之间的结合能力与作用模式。基于糖尿病肾病-“枸杞-桑椹-覆盆子汤”共同作用靶点与核心团簇分析，筛选出β-谷甾醇、大豆黄素、桑色素、槲皮素、β-胡萝卜素和鞣花酸为活性作用成分，IL6、IL1B、PPARG、MMP9和VEGFA为核心作用靶点，分子对接结果显示，主要活性成分与靶点均具有较高结合能。通过“枸杞-桑椹-覆盆子汤”提取物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、羟基自由基和2，2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）阳离子自由基清除能力测试试验发现，“枸杞-桑椹-覆盆子汤”具有较高的抗氧化能力，对糖尿病肾病可起到保护作用。该研究初步揭示了“枸杞-桑椹-覆盆子汤”以“多成分-多靶点-多通路”模式协同治疗糖尿病肾病的作用机制与抗氧化机制，为传统药膳“枸杞-桑椹-覆盆子汤”的产业化应用提供了理论依据。     

基于蛋白组学体外分析益母草水煎液对补体和凝血级联通路相关活性因子的作用

旨在通过蛋白组学探索益母草水煎液对人真皮微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells, HDMECs)凝血与抗凝血相关因子表达的调节作用。MTT法筛选益母草水煎液对HDMECs的安全浓度；使用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification, iTRAQ)技术分析50和100 μg·mL^-1益母草水煎液作用24 h后HDMECs蛋白表达谱的变化，通过对比各组蛋白谱的变化筛选出差异显著的相关通路，分析该通路中筛选到的可信差异表达蛋白(differentially expressed proteins, DEPs)，并选取可信DEPs中与凝血与抗凝血相关的拮抗因子进行RT-PCR和ELISA验证。结果表明：1 mg·mL^-1以下益母草水煎液对HDMECs无毒副作用；益母草水煎液能够同时调节与凝血相关的血小板活化等过程和与抗凝血相关的肝素结合过程。对筛选出的补体和凝血级联通路中的5种可信DEPs分析显示，与空白组相比，50 μg·mL^-1益母草水煎液组凝血酶原(F2)、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、凝血因子Ⅴ(F5)和激肽原(KNG)同时显著下调，100 μg·mL^-1益母草组F2、t-PA、AT-Ⅲ、KNG显著下调；与50 μg·mL^-1益母草水煎液组相比，100 μg·mL^-1益母草水煎液组F2、AT-Ⅲ、t-PA、F5和KNG等凝血级联相关因子均显著升高。结果提示，益母草水煎液可显著改变HDMECs蛋白表达谱，并可能通过调控补体和凝血级联通路相关因子F2、AT-Ⅲ、t-PA、F5、KNG蛋白的表达对凝血与抗凝血相关拮抗因子发挥双向调控作用。     

HPLC法测定芪蓝囊病饮中的靛玉红

建立了芪蓝囊病饮中靛玉红的高效液相色谱(HPLC-PDA)检查方法。采用C18(250 mm×4.6 mm×5 μm),柱温35 ℃，以乙腈-0.2%磷酸水进行梯度洗脱，波长采集范围为200~640 nm，流速为1.0 mL/min，进样量10 L，提取检测波长为289 nm。靛玉红在0.5~2.0 μg(R² =0.9991)线性关系良好，平均加样回收率90.0%(RSD=1.36%,n=6)。所建方法色谱分离较好，前处理简单，可用于芪蓝囊病饮中的靛玉红的含量测定，为完善芪蓝囊病饮的质量标准提供依据。